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Le Joker était un simple gangster à la solde de Salvatore Valestra pour le compte de qui il a notamment assassiné l’homme d’affaires Carl Beaumont. Des années plus tard, alors qu’il cambriolait les usines chimiques Ace, il se retrouva confronté à Batman et tomba dans une cuve d’acide en voulant lui échapper. Au lieu de le tuer, le produit colora sa peau en blanc, ses cheveux en vert et donna à sa bouche un rictus permanent. Il semble que cet accident altéra dramatiquement sa raison et le transforma en Joker, ce criminel fou furieux nourrissant une haine mortelle à l’endroit du Justicier de Gotham. Lors d’un de ses séjours à l’Asile d’Arkham, le Joker réussit à séduire une nouvelle psychiatre — le docteur Harleen Quinzel — qui devint elle-même criminelle sous le pseudonyme d’Harley Quinn et l’aida à s’évader.
Dans Batman : La Série animée
Le Joker affronte Batman a de nombreuses reprises. Ses objectifs sont très variés : tantôt le criminel cherche à éliminer le héros ou des notables tels que le Maire ou le Commissaire, tantôt il cherche à organiser des hold-ups élaborés pour faire fortune. Le Joker accorde beaucoup d’importance à sa notoriété et à la crainte qu’il inspire : on le voit régulièrement détourner les ondes télévisées pour organiser son propre show mortel comme dans Joyeux Noël Batman ou dans Il s’en est fallu de peu. Il arrive aussi que le Joker organise des plans de chantage, de terrorisme ou de destructions massives comme dans Harlequinade où il projette de raser Gotham City avec une énorme bombe.
Le Joker assurera aussi le rôle de juge lors du procès de Batman à l’asile d’Arkham et, curieusement, lorsqu’un certain Sidney parvient à tuer le Croisé Masqué, du moins supposément, le Joker exécutera ce petit criminel qui l’a privé de sa victoire et organisera les funérailles de son ennemi.
Dans Batman contre le Fantôme Masqué
Les anciens membres du clan Valestra sont éliminés les uns après les autres par le mystérieux Fantôme Masqué. Ayant lui-même tué son ancien employeur, le Joker se retrouve confronté au mystérieux personnage qui s’avère être Andréa Beaumont, le grand amour de Bruce Wayne. Celle-ci, ne pouvant renoncer à sa vengeance, semble disparaître en emportant le Joker.
Dans Superman : La Série animée
Le Joker débarque à Metropolis avec un énorme morceau de kryptonite et propose ses services à Lex Luthor pour se débarrasser de Superman. Il y serait certainement arrivé sans l’intervention de Batman ! Le Joker subtilise ensuite une aile volante de la Lexcorp avec laquelle il menace de détruire Metropolis. Il sera laissé pour mort dans l’explosion de l’engin.
Dans The New Batman Adventures
Ayant mis Batgirl en danger, le Joker est indirectement le responsable de la séparation de Batman et Robin : le Jeune Prodige est en effet entré dans une colère noire envers son mentor qu’il jugeait responsable de sa petite amie.
Un jour, héritant d’une immense fortune, le Joker rachète son innocence et commence une vie rangée à Gotham jusqu’à ce qu’il comprenne que cet héritage n'est qu'une supercherie d’outre-tombe. Poursuivi par le fisc, il se voit contraint à reprendre ses activités malhonnêtes…
Plus tard, alors que le journaliste Jack Ryder tourne un reportage télévisé dans les usines Ace sur les origines du Joker, ce dernier fait irruption et jette le malheureux dans la cuve d’acide. Subissant un sort similaire, Jack Ryder devient le Creeper, une créature fantasque qui veut à son tour se venger du Joker…
Dans Static Choc
Le Joker débarque à Dakota et réunit un groupe de méta-humains pour commettre des forfaits. Static s’associe alors à Batman et Robin pour défaire leurs plans.
Dans La Ligue des Justiciers
Pour vaincre la Ligue des Justiciers, Lex Luthor a réuni un groupe de super-criminels au sein duquel le Joker s’invite de lui-même : il leur sera d’un précieux secours puisqu’il permettra de capturer Batman et de remporter le combat contre les autres héros.
Ultérieurement, le Joker pirate une chaîne télévisée pour diffuser un reality-show au cours duquel la Ligue des Justiciers doit retrouver des bombes disséminées dans tout Las Vegas. Le Prince du Crime est aidé par le Gang du Flush Royal — un groupe de jeunes méta-humains qu’il a libéré de l’emprise du Gouvernement.
Dans Batman : La Relève
Un jour, le Joker enleva le jeune Robin II et, sous l’effet de la torture, lui fit avouer l’identité de Batman avant d’en faire une sorte de Joker Junior. À cette occasion, Batman et son "Némésis" disputèrent leur combat le plus violent qui se solda par la mort du Joker !
40 ans plus tard, alors que Terry McGinnis a repris le costume de Batman, le Joker refait mystérieusement surface ! Il se rend au Manoir Wayne où il essaie de tuer Bruce devenu vieux. Ayant détourné un satellite, le Joker commence ensuite à s’attaquer à Gotham, mais Batman parvient à percer son secret : une nano-puce renfermant toutes les informations génétiques du criminel a été implantée sur Tim Drake, faisant de lui une réelle réincarnation du Joker !
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